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【技術コラム】セルファイン フォスフェイトによるT7 RNAポリメラーゼの精製事例

最終更新日: 2022/06/23

上記では、電子ブックの一部をご紹介しております。

カタログ発行日:2022/6/23
mRNA薬の合成で重要なT7 RNAポリメラーゼをセルファイン フォスフェイトで高純度に精製
T7 RNAポリメラーゼはRNA合成酵素です。鋳型となるDNAからmRNAを
産生する際に用いられます。

近年の新型コロナウイルス感染症(COVID-19)のワクチンとして有名になったmRNAワクチンの製造過程において、T7 RNAポリメラーゼがmRNAの合成酵素として用いられています。

セルファイン フォスフェイトは核酸結合タンパク質と親和性を持つアフィニティークロマトグラフィー担体です。T7 RNAポリメラーゼは核酸結合タンパク質のためセルファイン フォスフェイトで効率的な精製を行うことができます。

このレポートでは大腸菌にT7 RNAポリメラーゼを発現させた後、その発酵液をセルファイン フォスフェイトおよびセルファインMAX DEAE(弱アニオン交換担体)で高純度に精製した事例を紹介します。

アフィニティークロマトグラフィー担体であるセルファイン フォスフェイトを用いることで極めて高純度の酵素が精製できます。

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関連情報

セルファイン フォスフェイト/RNA ポリメラーゼの精製
セルファイン フォスフェイト/RNA ポリメラーゼの精製 製品画像
【特徴】
・ベース担体:球状セルロース粒子
・リガンド:リン酸エステル基
・リガンド濃度:0.3 - 0.8meq/ml
・タンパク質吸着量:≧ 20mg/ml-gel (リゾチーム)

RNAポリメラーゼなどの核酸結合性タンパク質とアフィニティー吸着します。リン酸基が負に帯電していますので、エンドトキシンなどの負に帯電した不純物を吸着させません。

定置洗浄は0.2M の水酸化ナトリウムを使用することができます。
このため繰り返し使用することができます。

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バイオ医薬用 クロマトグラフィー充填剤『セルファイン』
バイオ医薬用 クロマトグラフィー充填剤『セルファイン』 製品画像
【ラインアップ(抜粋)】
■アルカリ耐性プロテインAクロマトグラフィー
・セルファイン SPA-HC:抗体医薬の精製用プロテインA担体です。世界最高クラスの吸着性能を発揮します。
■アフィニティークロマトグラフィー
・セルファイン サルフェイト:ワクチン精製のグローバルスタンダードな充填剤です。豊富な採用実績があります。
・セルファイン ETクリーン:エンドトキシンの除去が可能なユニークな充填剤です。
・セルファイン フォスフェイト:核酸結合タンパク質を精製できます。mRNA医薬の製造に必須のRNA結合タンパク質の精製に適しています。
■イオン交換クロマトグラフィー
・セルファイン A-200/A-500/A-800
・セルファイン Q-500
■疎水性相互作用クロマトグラフィー
・セルファイン MAXフェニル
■ゲルろ過クロマトグラフィー
・セルファインGCL-2000HF
・セルファインGH-25

その他ユニークなクロマトグラフィー充填剤を多数ラインアップしています。

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ウイルス精製用クロマトグラフィー『セルファイン サルフェイト』
ウイルス精製用クロマトグラフィー『セルファイン サルフェイト』 製品画像
【その他の特徴】
■密度勾配超遠心法よりも効率的に精製対象物から培養液や宿主細胞由来の夾雑物を除くことができる
■クロマトグラフィーで精製するため、密度勾配遠心分離と比べて、精製と濃縮が同時に達成
■中性付近の穏やかな条件で吸着、溶出が可能なため、収率の向上を実現
■ い耐圧性を持つため、高流速での操作が可能
■製造スケールの大型カラムでの使用実績が豊富
■論文、特許など多数の参照事例

【ウイルス・ウイルス抗原・微生物抗原への吸着特性】
・狂犬病ウイルス
・インフルエンザウイルス
・日本脳炎ウイルス
・西ナイル熱ウイルス
・デング熱ウイルス
・ネコ白血病
・ネコカリシウイルス
・RSウイルス
・ヒトヘルペスウイルス
・ヒト麻疹ウイルス
・ヒトパラインフルエンザウイルス
・ヒトコロナウイルス(OC43)
・ヘルペス単純ウイルス gA and gB glycoprotein Subunits
・B型肝炎表面抗原
・百日咳菌由来ヘマグルチニン
・インフルエンザウイルスヘマグルチニン

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抗体精製用クロマトグラフィー『セルファインSPA-HC』
抗体精製用クロマトグラフィー『セルファインSPA-HC』 製品画像
【製品の特長】
■リガンド:アルカリ耐性プロテインA
■担体:高架橋セルロース粒子
■平均粒径:70um
■使用流速:≧650 cm/h (0.3 Mpa時)
 内径30 cm-ベッド高さ20 cm、純水24 ℃で計測
■動的吸着量(DBC):≧ 70 mg /ml (C10 with Polyclonal IgG)
 滞留時間6分でのロードで10%ブレークスルーポイント時の計測
■推奨CIP 溶液:0.1 M NaOH
■操作時の温度:4 - 50 ℃
■保管温度:2 - 8 ℃ in 20 % ethanol
■化学安定性:1週間の浸漬試験で吸着量に劣化は見られなかった。
 30 %イソプロパノール、20 – 70 %エタノール、8 M尿素、6 Mグアニジン塩酸塩、0.1 M酢酸
■pH安定性:3-12

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抗体医薬の効率的なポリッシング精製『セルファイン MAX IB』
抗体医薬の効率的なポリッシング精製『セルファイン MAX IB』 製品画像
【その他の特徴】
ベース担体:高度架橋セルロース粒子
平均径:平均 90 µm
リガンド :ポリアリルアミン、部分的にブチル基を修飾
イオン交換容量:> 80 μeq/mL
定置洗浄(CIP):0.5 M NaOH
滅菌:オートクレーブ 121 o C、20 min
推奨洗浄条件:エタノール (70%)、イソプロパノール (30%)、グアニジン HCL (6M)、尿素 (6M)

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抗体凝集体の除去に優れた効果を発揮『セルファイン MAX GS』
抗体凝集体の除去に優れた効果を発揮『セルファイン MAX GS』 製品画像
【その他の特徴】
平均粒径: 90 μm
リガンド: -R-SO3-Na+
イオン交換容量 : 0.09〜0.15 m mol / ml
リゾチーム吸着量 : ≧ 100 mg / ml
ポリクロ―ナルIgG 動的吸着量:≧ 70 mg / ml 10%ブレークスルー時
操作圧力: < 0.3 MPa
pH安定性: pH 2 ~ 13


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